بیان مینی ژنهای فاکتور 9 انعقادی انسانی در سلولهای کلیه انسان

Authors

Abstract:

Background & aims: Hemophilia B is caused by either functional deficiency or lack of the human coagulation factor IX (hFIX). The current protein-based therapy with plasma-derived proteins increases, the risk of blood-borne pathogens transmission. Therefore, replacement therapy with recombinant hFIX (rhFIX) is an attractive alternative to plasma derived hFIX concentrates. In order to express and produce rhFIX protein, an efficient expression vector with suitable cis-regulatory elements such as intronic sequences is required. Materials & Methods: Four hFIX-expressing plasmids with or without human β-globin (hBG) introns (intron I and intron II) inside the hFIX-cDNA and the Kozak element were constructed and introduced into the Hek-293T cells using transfection method. Next, the efficacies of the plasmids were evaluated by performing ELISA on cultured media during 3 days of post-transfection as well as semi-quantitative RT-PCR. Results: The highest hFIX expression levels were obtained from the intron-less and intron-I containing plasmids after 3 days of transfection. The first hBG intron was more effective than the second one. Furthermore, the highest mRNA level was obtained from the intron-less construct. Conclusion: Intron-less and intron-I containing plasmids were more effective compared to other constructs for expression of hFIX. Application of the hBG intronic sequences reduced the hFIX expression levels, probably due to improper splicing of the hBG introns from the hFIX pre-mRNAs. SOURCE: URMIA MED J 2016: 27(7): 597 ISSN: 1027-3727

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

بیان مینی ژنهای فاکتور ۹ انعقادی انسانی در سلولهای کلیه انسان

پیش زمینه و هدف: نقص در عملکرد فاکتور 9 منجر به بیماری هموفیلی b می گردد. استفاده از فرآورده های پلاسمایی جهت جلوگیری از خونریزی، خطر انتقال عوامل عفونی را افزایش می دهد. بنابراین امروزه استفاده از فاکتور 9 نوترکیب، به عنوان جایگزین مناسب نوع پلاسمایی آن مطرح شده است. به منظور بیان و تولید فاکتور 9 نوترکیب، استفاده از یک وکتور بیانی با توالی های تنظیمی سیس مناسب ازجمله توالی های اینترونی لازم ا...

full text

بررسی بیان مینی ژن‌های فاکتور 9 انسانی در سلول‌های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان

زمینه:سلول‌های بنیادی مزانشیمی هدف مناسبی جهت سلول درمانی و ژن درمانی بیماران هموفیلی B محسوب می‌شوند. این سلول‌ها دارای ویژگی‌های بی‌نظیر از جمله تمایز به طیف وسیعی از سلول‌های مختلف و ایمنی‌زایی اندک در شرایط پیوند می‌باشند که آن‌ها را برای سلول درمانی و ژن درمانی مناسب کرده است. بیان اندک ترانس ژن از مشکلات ژن درمانی است. با شناسایی توالی‌های تنظیمی و استفاده از آن‌ها در موقعیت‌های مناسب در ...

full text

تاثیر اینترون 1 ژن بتاگلوبین انسانی بر روی بیان موقت فاکتور 9 انعقادی فعال انسانی در رده‌ای از سلول‌های پستانداران

  چکید ه   سابقه و هدف   تاثیر حضور اینترون‌ها در افزایش بیان ژن‌ها در سلول‌های پستانداران نشان داده شده است. در این مطالعه کارایی اینترون 1 ژن بتاگلوبین انسانی بر بیان موقت cDNA فاکتور 9 انسانی در رده سلولی تخمدان‌ هامستر چینی( CHO ) تحت کنترل پروموتر سیتومگالوویروس نشان داده شد.   مواد وروش‌ها   مطالعه انجام شده از نوع تجربی بود. در این پژوهش اینترون 1 ژن بتاگلوبین انسانی بین اگزون‌های 1 و 2 ...

full text

تأثیر توالی کوزاک در بیان موقت مینی‌ژنی از فاکتور 9 انعقادی در سلول‎های پستاندار

زمینه: قابلیت توالی کوزاک در افزایش بیان ژن های یوکاریوتی مشخص شده است. با توجه به این موضوع می توان از این توانمندی در جهت افزایش بیان پروتئین های نوترکیب استفاده کرد. مواد و روش‌ها: با هدف بالا بردن بیان ژن فاکتور IX انعقادی، سازه ای بیانی مجهز به پروموتر سایتومگالو ویروس انسانی (CMV) که بیان یک مینی ژن فاکتور IX را تحت کنترل داشت، به توالی کوزاک تجهیز شد. پس از تأیید صحت سازه نوترکیب، این سا...

full text

جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO

جداسازی، کلونینگ و بیان ژن فاکتور VII انعقادی نوترکیب انسانی در رده سلولی CHO راحله حلبیان1، ناصر شاگردی اسماعیلی2، آرزو اوودی2، ناصر مسروری3، دکتر ناصر امیری‌زاده4، دکتر کامران موسوی حسینی5، دکتر احمد قره‌باغیان6، دکتر حوری رضوان7، دکتر محمد علی جلیلی8، دکتر مهریار حبیبی رودکنار9 چکیده سابقه و هدف فاکتور VII ، یک گلیکوپروتئین پلاسمایی است که در آبشار انعقادی تشکیل فیبرین، شرکت دارد....

full text

تأثیر توالی کوزاک در بیان موقت مینی ژنی از فاکتور ۹ انعقادی در سلول‎های پستاندار

زمینه: قابلیت توالی کوزاک در افزایش بیان ژن های یوکاریوتی مشخص شده است. با توجه به این موضوع می توان از این توانمندی در جهت افزایش بیان پروتئین های نوترکیب استفاده کرد. مواد و روش ها: با هدف بالا بردن بیان ژن فاکتور ix انعقادی، سازه ای بیانی مجهز به پروموتر سایتومگالو ویروس انسانی (cmv) که بیان یک مینی ژن فاکتور ix را تحت کنترل داشت، به توالی کوزاک تجهیز شد. پس از تأیید صحت سازه نوترکیب، این سا...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 27  issue 7

pages  589- 597

publication date 2016-10

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023